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科研體系

致力于生命研究、生物檢測技術(shù)的多領(lǐng)域開發(fā)

蛋白標(biāo)記概述

蛋白標(biāo)記(protein labeling)是通過體內(nèi)或者體外方法將標(biāo)記物與目的蛋白結(jié)合的技術(shù)。標(biāo)記后的蛋白仍保持蛋白活性,標(biāo)記物既可以作為示蹤劑指示與蛋白相關(guān)的反應(yīng),也可以作為干預(yù)物作用于目標(biāo)蛋白或者細(xì)胞。隨著近年技術(shù)發(fā)展,尤其是綠色熒光蛋白(GFP,green fluorescent protein)的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用,蛋白標(biāo)記技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著越來越大的作用。

目的

標(biāo)記蛋白不僅可以作為監(jiān)測生命過程、檢測目的靶物的分析檢測手段,也可以通過利用蛋白活性和標(biāo)記物作用作為干預(yù)及治療的手段。近年來,已利用重組單克隆抗體偶聯(lián)放射性同位素、免疫毒素或化學(xué)藥物,成功制備了精準(zhǔn)治療的靶向藥物,為腫瘤及自身免疫病等重大疾病治療提供了新型工具。

分類

根據(jù)標(biāo)記物的類型可以分為放射性同位素標(biāo)記、熒光素/熒光蛋白標(biāo)記、酶標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)(包括吖啶酯、魯米諾等)標(biāo)記、納米材料(膠體金、膠體硒、乳膠微球、量子點(diǎn)等)標(biāo)記等。

方法

蛋白標(biāo)記方法需根據(jù)蛋白自身性質(zhì)和標(biāo)記物類型建立相應(yīng)的技術(shù)方案:
1、放射性同位素標(biāo)記:具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、適用性廣、定位準(zhǔn)確等特點(diǎn),常用的同位素包括125I、131I、32P等。同位素標(biāo)記的關(guān)鍵在于,測定放射性強(qiáng)度的條件和合適的比活度。標(biāo)記過程包括實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、標(biāo)記實(shí)驗(yàn)及放射性廢物處理等階段。
2、熒光標(biāo)記:將熒光材料與目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成熒光結(jié)合物。熒光材料包括熒光素(FITC、羅丹明、5-FAM等)、自發(fā)熒光蛋白、納米晶體材料(量子點(diǎn))等。標(biāo)記方法也根據(jù)各類熒光材料的不同性質(zhì),有很大差異。
3、酶標(biāo)記:常見標(biāo)記用的酶分子包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶及葡萄糖氧化酶等。采取的偶聯(lián)方法包括:戊二醛法、苯醌法、偶氮法等。
4、生物素(biotin)標(biāo)記:生物素分子量小,對蛋白質(zhì)自身活性影響小,重要的是,生物素與親和素(avidin)有很高的親和力,可以大幅度提高檢測靈敏度。因此,生物素標(biāo)記已成為一種常用而有效的蛋白標(biāo)記技術(shù)手段。
5、其它標(biāo)記方法:熒光蛋白可通過基因水平操作,將熒光蛋白基因與目的蛋白基因重組,再表達(dá)重組蛋白。納米顆粒還可通過物理方法吸附蛋白,形成標(biāo)記物。

  • 技術(shù)特點(diǎn)

    現(xiàn)已開發(fā)了多種蛋白標(biāo)記技術(shù),以此為基礎(chǔ)成功建立了高靈敏度、高特異性、穩(wěn)定方便的生物檢測工藝平臺,適用于ELISA、免疫化學(xué)發(fā)光、納米金/熒光微球免疫層析等免疫檢測產(chǎn)品開發(fā)。我公司建立的酶蛋白標(biāo)記技術(shù)具有高標(biāo)記率、高活性、高純度等特點(diǎn),能夠適用于各類不同類型的蛋白分子的標(biāo)記。目前還開發(fā)了熒光微球標(biāo)記技術(shù),標(biāo)記微球粒度均一、單分散性好、發(fā)光效率高,具有靈敏度高、線性范圍寬等特點(diǎn),可廣泛應(yīng)用于高通量免疫檢測與分析、基因檢測等方面。

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