蛋白標(biāo)記方法需根據(jù)蛋白自身性質(zhì)和標(biāo)記物類型建立相應(yīng)的技術(shù)方案:
1、放射性同位素標(biāo)記:具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、適用性廣、定位準(zhǔn)確等特點(diǎn),常用的同位素包括125I、131I、32P等。同位素標(biāo)記的關(guān)鍵在于,測定放射性強(qiáng)度的條件和合適的比活度。標(biāo)記過程包括實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、標(biāo)記實(shí)驗(yàn)及放射性廢物處理等階段。
2、熒光標(biāo)記:將熒光材料與目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成熒光結(jié)合物。熒光材料包括熒光素(FITC、羅丹明、5-FAM等)、自發(fā)熒光蛋白、納米晶體材料(量子點(diǎn))等。標(biāo)記方法也根據(jù)各類熒光材料的不同性質(zhì),有很大差異。
3、酶標(biāo)記:常見標(biāo)記用的酶分子包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶及葡萄糖氧化酶等。采取的偶聯(lián)方法包括:戊二醛法、苯醌法、偶氮法等。
4、生物素(biotin)標(biāo)記:生物素分子量小,對蛋白質(zhì)自身活性影響小,重要的是,生物素與親和素(avidin)有很高的親和力,可以大幅度提高檢測靈敏度。因此,生物素標(biāo)記已成為一種常用而有效的蛋白標(biāo)記技術(shù)手段。
5、其它標(biāo)記方法:熒光蛋白可通過基因水平操作,將熒光蛋白基因與目的蛋白基因重組,再表達(dá)重組蛋白。納米顆粒還可通過物理方法吸附蛋白,形成標(biāo)記物。